细胞融合的方法有多种，常见的包括转动法和离心法。在进行细胞融合时，通常将脾细胞与骨髓瘤细胞的比例设定为1:1至10:1，其中3:1或5:1的比例最为普遍使用。

试剂与材料

1. 供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。

2. 1640培养液100ml。

3. 完全1640液100ml。

4. 25% FCS－1640液50ml。

5. HAT培养液100ml。

6. 50% PEG：选择分子量4000的高纯度PEG（日本进口或Serva），取10g放入25ml瓶中进行高压灭菌。使用前，将预热至40℃的1640液10ml与PEG以等量（W/V）混合，并用酚红检查pH，通常无需调整，如有变化，可使用HCl或NaHCO3进行调整。

7. 10ml和50ml的灭菌沉淀管或瓶。

8. 40孔塑料培养盘。

操作方法

1. 首先准备好脾细胞。

2. 在50ml沉淀管中混合10^8脾细胞和10^7小鼠骨髓瘤细胞，加入50ml的25% FCS－1640液。

3. 在室温下，以400g进行离心3分钟，使细胞沉淀。

4. 移去上清液。

5. 轻敲管底，使沉淀流动，并将沉淀管放入40℃水浴中，以达到融合温度。

6. 加入预热至40℃的50% PEG 8ml，使用1ml吸管缓慢滴加，同时轻轻摇动沉淀管，直到肉眼观察到颗粒产生。这一过程应持续2分钟。

7. 加入1ml的1640液，边加边摇动，持续1分钟。

8. 重复第7步一次。

9. 再次加入1ml的1640液，边加边摇动，持续0.5分钟。

10. 重复第9步一次。

11. 加入1640液15ml。

12. 在室温下，以400g离心1分钟，使细胞沉淀。

13. 移去上清，轻敲管底后加入25ml含有HAT的完全1640液。

14. 将融合的细胞液以每孔1滴（约0.05ml）的量滴加到已培养有饲养细胞的40孔塑料培养盘中。

15. 轻摇后，将其放入设定为5% CO2饱和湿度的37℃培养箱中进行培育。

16. 在第3、6、9、10天，换入含HAT的完全1640培养液。注意轻轻吸取上清液，避免将固定在孔底的细胞吸出，并根据需要补充合适量的饲养细胞。

17. 在第12、15天再次加入含HAT的完全1640培养液。换液前可使用倒置显微镜观察，约10天左右可观察到杂交瘤细胞生长。大部分杂交瘤细胞将在10~20天内出现，但也有可能在约1个月后才出现。在观察到杂交瘤细胞后，吸取上清液，检测抗体。

18. 对继续生长的杂交瘤细胞进行增殖传代。在传代过程中，可根据情况取消HAT液和完全1640液，改用10% FCS－1640液。同时需在液氮中保存，并进行克隆化，确保每一代都检查抗体，以防止抗体细胞的变异和流失。

通过科学的细胞融合方法，我们能够实现有效的细胞交互和抗体生产，而尊龙凯时在这一领域提供了卓越的支持与产品，助力科研工作者的卓越表现。